Sellist muutuste seost kirjeldav matemaatiline mudel on majandushinnangutes kasutusel Nelsoni valemi nime all ja majandusmatemaatikutele tuttav kui Cobbi-Duglase tootmisfunktsioon. Vajaduse korral võidakse jäätmed isegi maavarana arvele võtta 2.

Kuigi on tehtud märkimisväärseid jõupingutusi, et mõista, kiire roobastee rasva kadu pdf α-conotoxin GIC on α3β2 nAChR suhtes tugevalt selektiivne, pole seda küsimust veel kiire roobastee rasva kadu pdf. Selle kristallstruktuuri põhjal, mis on täiendatud molekulaarsete dokkimisandmetega, soovitame GIC-i võtmejääke selle kõrge afiinsuse ja selektiivsuse kuidas poletada rasva sudamest inimese α3β2 ja α3β4 nAChR-de suhtes.

igasona/igasona at master · ndri/igasona · GitHub

Neid soovitusi kontrolliti radioligandi ja elektrofüsioloogiliste eksperimentidega, mis kinnitasid tuvastatud kontaktide funktsionaalset rolli GIC interaktsioonidel Ac- AChBP ja α3β2 nAChR alatüüpidega. Sissejuhatus Atsetüülkoliini siduva valgu AChBP avastamine ja kristalliseerumine magevee molluskist Lymnaea stagnalis 1, 2 oli suur samm, et mõista nii nikotiinhappe atsetüülkoliini retseptorite nAChR kui ka teiste ligandiga sisestatud ioonikanalite struktuuri ja funktsiooni.

Cys-loop-retseptorite perekonda. Esimene röntgenkiirte struktuur 2, mis põhineb seotud puhvri molekuli paigutusel, andis esimesed ideed seondumiskohtade lokaliseerimisele AChBP allüksuste ja ka tõeliste nAChR-de vahelises liideses. Huvitav on see, et see struktuur näitas, et nikotiini kinnitusega kaasneb AChBP silmus C märkimisväärne kaalulangus foods tips perifeeriast keskteljele ja lõpuks näib, et see ahel hõlmab nikotiini.

Neil kahel valgul on oma afiinsuses märkimisväärsed erinevused nii α-neurotoksiinide kui ka erinevate α-konotoksiinide suhtes ning see on üks tegureid, mis astub sammu AChBP komplekside kõrge eraldusvõimega röntgenkiirte struktuurist eraldiseisva raskem on samu ligande siduvad nAChR-id.

Muud komplikatsioonid on tingitud arvutimodelleerimismeetodite piirangutest AChBP komplekside koordinaatidest lähtuvalt analüüsitud kiire roobastee rasva kadu pdf nAChR alatüübi täpsest korraldusest. Α-konotoksiinide eeliseks on see, et teiste antagonistide seas on need kõige selektiivsemad vahendid, mis võimaldavad eristada nAChR-de 6, 7, 8, 9, 10 erinevaid alatüüpe.

Vaatamata Ac- AChBP-de erinevate a-konotoksiinide 5, 11, 12, 13 kompleksi röntgenkiirte struktuuride kättesaadavusele, on vaja täiendavat tööd, et mõista a-konotoksiinide interaktsioonide spetsiifilisust erinevate nAChR alamtüüpidega täieliku detailiga.

Need retseptorid esinevad inimese ajus, osalevad sellistes funktsioonides nagu kognitsioon ja teiste neuronaalsete nAChRide puhul peetakse neid paljulubavateks narkootikumide sihtmärkideks vt ülevaated 14, 15, See kõrge selektiivsus inimese neuronaalse α3β2 retseptori suhtes muudab selle üheks kõige atraktiivsemaks kolinergilisteks liganditeks, mis on leitud viimastel aastatel.

Kuigi on tehtud palju jõupingutusi, et mõista GIC kõrge selektiivsust inimese α3β2 nAChR 17, 18, 19 suhtes, ei ole vastus veel selge.

Tulemused Kompleksi üldine struktuur Putukarakkudes ekspresseeritud Ac-AChBP puhastati ja kristalliti koos sünteesitud a-conotoxin GIC-ga, kasutades aurude difusiooni istumise tilka meetodit. Kristallstruktuur määrati molekulaarse asenduse abil ja rafineeriti resolutsiooniks 2, 1 Å täiendav tabel 1. Kompleksis on seotud a-konotoksiinidel ühine orientatsioon, kusjuures tsentraalne heeliks ulatub Ac- AChBP ligandi sidumissaiti ja seondunud a-konotoksiini N- ja C-otsadesse ligandi sidumise põhjas ja ülemisel osas.

• 63 lb kaalulangus
• Kuigi on tehtud märkimisväärseid jõupingutusi, et mõista, miks α-conotoxin GIC on α3β2 nAChR suhtes tugevalt selektiivne, pole seda küsimust veel lahendatud.
• Maksimaalne ohutu iganadalase kaalulangus
• Karl August Feldweber sündis 4.
• "Патрик сохранил в себе детскую наивность.

B pentameeri kahe külgneva protomeeri külgvaade seotud a-conotoxin GIC molekuliga magenta. C kahe külgneva protomeeri pinna mudeli külgvaade, mis on seotud siduva taskuga seotud a-conotoxin GIC molekuliga magenta. Kõigi viie erineva a-konotoksiini sidumisrežiim oli sarnane peptiidi tsentraalse heeliksiga, mis tõusis välja Ac- AChBP sidumissaiti joonis fig 2Akuid üksikasjalikud interaktsioonid on erinevad peptiidide vaheliste aminohapete erinevuste tõttu joonis fig.

Disulfiidsildad Cys2-Cys8 ja Cys3-Cys16 vahel on näidatud punaselt. Koostoime keemiline olemus sellel küljel on segu hüdrofoobsetest ja hüdrofiilsetest interaktsioonidest.

Sellel küljel oli GIC-s märkimisväärne interakteeruv jääk Gln, mille külgahelas paiknes tasku, mis koosnes jääkide kontaktidest Arg, Val, Thr, Ser ja Metga.

AChBP joonis 3B. Täissuuruses tabel A Disulfiidsildade pakkimine ja vesiniksideme vastastikmõjud esindatud musta katkendjoonega põhipoolsel küljel.

Täissuuruses pilt Α3β2 nAChR alamtüübiga GIC komplekside molekulaarne dokkimine ja modelleerimine GIC blokeerib potentsiaalselt inimese nAChR α3β2 alamtüübi, näidates kõrgeimat teadaolevat selektiivsust kordne selektiivsus a3β2 alatüübi suhtes võrreldes nAChR-i lihaste retseptoriga mis tahes nikotiiniligandi neuronite ja lihaste alatüüpide suhtes, mida iseloomustab siiani Metsik-tüüpi GIC ja need kuus analoogi sünteesiti tahkefaasilise peptiidi sünteesiga.

Sünteetiliste GIC mutantide iseloomustamist pöördfaasi kõrgefektiivse vedelikkromatograafia HPLC ja massispektromeetria abil on näidatud täiendavas joonisel 1. Kõige olulisem muutus täheldati His5Ala mutatsiooni puhul IC50 väärtuse peaaegu kordse suurenemisega joonis 4B.

Copy \u0026 Paste Videos And Earn $200 Per Video (FULL Tutorial - Not YouTube) Make Money Online!

Iga punkt on ühe katse iga kontsentratsiooni kahe mõõtmise keskmine ± sem väärtus. Arvutatud ICso väärtus on 29 ± 2 nM. Sidumissaite moodustavate nAChR alamühikute piirkonnad on näidatud joonisel fig.

(PDF) Mäeinstituut 75 | Ingo Valgma - toa.ee

P4-alaühikus tasku moodustavad jäägid muudeti Glu, Ile, Arg, Ser ja Leuks, mis, välja arvatud Arg, olid samad või sarnased vastavate jääkidega. Arg, millel on seriiniga, treoniiniga ja valiiniga võrreldes pikem külgahel, võib selles taskus olla steeriline takistus, mis mahutab GIC-i Gln ja võib isegi sellega kokku puutuda joonis 5C. C Arg inimese p4 taskus võib tuua kaasa steerilise takistuse ja isegi steerilised kokkupõrked GIC-i Glnga ja seejärel halvustada a3β4 seondumist võrreldes a3β2 nAChR-ga.

Selle tulemusena on erinevatel α-konotoksiinidel selektiivsus laiaulatuslik erinevate nAChR alatüüpide suhtes, mis kajastuvad erinevates farmakoloogilistes omadustes täiendav tabel 3.

Thr asendamine β2 subühikuga Lys poolt β4 alaühikus tooks kaasa steerilised kokkupõrked ImI Trp jäägiga, mis selgitab vähenenud afiinsust a3β4 alatüübi 7, 12 suhtes.

Selle asemel on nendes kahes asendis His-5 ja Gln jäägid. Radioligandi sidumise ja elektrofüsioloogia katsed olid tundlikkuse poolest erinevad, kuid mõlema katse tulemused näitasid ühist kalduvust: His5Ala mutant näitas Ac- AChBP seondumise ja α3β2 nAChR funktsionaalse blokeerimise kõige suuremat vähenemist ning Gln13Ala asendusel oli vähim mõju GIC aktiivsusele mõlemas katses joonis 4B ja tabel 2.

Seetõttu vähendaks selle mutatsioon alaniiniga selle inhibeerivat toimet, vähendades interaktsioone ümbritsevate türosiinijääkidega a3 alaühikus. Sarnaselt His-5 positsioonile mõjutasid peamise külje interaktsioonides osalenud Ala-7, Asn ja Asn positsioonide aminohappejääkide asendused olulisel määral GIC aktiivsust mõlemas analüüsis joonis fig.

TALLINNA TEHNIKAÜLIKOOL MÄEINSTITUUT - PDF Free Download

Leutsiini või glütsiini muutus näib olevat nende interaktsioonide katkestamiseks ja seega vähendavad GIC aktiivsust joonis 4B ja tabel 2. Need tulemused koos varasemate uuringutega teiste α3β2 nAChR selektiivsete α-konotoksiinide kohta näitasid, et a-conotoxin kõrge afiinsus ja spetsiifilisus α3β2 nAChR alatüübile määratakse põhiliselt selle koostoime kaudu selle retseptori peamise küljega Seevastu Gln puhul, mis asub taskus, mille moodustavad jäägid Arg, Val, Thr, Ser ja Met Ac- AChBP komplementaarsel küljel joonis 3Bselle alaniini asendamine ei mõjutanud oluliselt mõlema analüüsi aktiivsust joonis 4B ja tabel 2.

Varasemad uuringud on näidanud, et a-konotoksiinijäägid komplementaarsel küljel, nagu Trp ImI-s, on toksiini retseptori selektiivsuse seisukohast olulised. Samuti toetasid meie ettepanekud α3β2 ja α3β4 mudelitega tehtud dokkimisuuringud. Α-konotoksiini GIC komplekside mudelid α3β2 ja α3β4 nAChRidega olid eelnevalt loodud molekulaarse dokkimise meetoditega Need mudelid näitasid, et GIC-i suurem afiinsus α3β2 ja α3β4 suhtes oli tingitud a3β2 alatüübi jääkidest, mis paiknevad ligandiga tihedamalt kui vastavad jäägid a3P4 alatüübis.

1. 10 protsenti kaalulanguskaart
2. 15-minutiline rasva poletamine
3. Rapid kaalulangus koht

Siiski ei ole selgitatud, miks a3β2 alatüübi jäägid paiknevad tihedamalt GIC-ga. Meie AChBP-ühekristallstruktuuril põhinev mudel võimaldas meil järeldada, et peamine põhjus, miks α3β4 vähenes afiinsus GIC-le, on tõenäoliselt steeriline kokkupõrge P4-subühiku Arg jäägi ja peptiidi Gln jäägi vahel. Eelkõige ei põhjustanud ükski asendus G3 afiinsuse suurenemist a3β4 nAChR suhtes tabel 2. Üldiselt näitasid meie tulemused, et keerukamad arvutimeetodid on vajalikud andmete õigeks ülekandmiseks α-konotoksiini või mis tahes muu ligandi ko-kristallstruktuurist tõelise retseptoriga, nagu näiteks Ac- AChBP.

Isegi selle mudeli puhul, kahest kõige olulisemast GIC jäägist His-5 ja Glnvõiksime meie arvates eksperimentaalselt kinnitada ainult His-5 rolli. See jääk oli samuti oluline α3β2 nAChR äratundmiseks. Kuid α3β4 nAChR puhul oli ülesanne vastupidine: eeldati, et valitud GIC asendused tõstavad afiinsust nende alatüüpide suhtes.

Üldiselt on afiinsuse või tegevuse suurendamine alati palju keerulisem ülesanne. Ilmselt on GIC-i kooskristallstruktuur Ac- AChBP-ga hea lähtepunkt ning ainult huvipakkuvate asendatud a-konotoksiiniraamatukogude ulatuslik järgnev loomine ja konkreetse huvitava nAChR-i laia mutagenees lahti löövad sidumise peenmehhanismid ja võivad aidata tugevamaid ja selektiivsemaid antagoniste ja agoniste.

Selle struktuuri põhjal saime α-konotoksiin GIC-ga α3β2-ga komplekseeritud täpsema mudeli ja esitleti ka võimalikke selgitusi GIC kõrge selektiivsuse kohta α3β2-le. Usume, et need tulemused aitavad paremini mõista α-konotoksiini selektiivsust erinevate nAChR alamtüüpide suhtes ja võivad hõlbustada a-conotoxin analoogide väljatöötamist terapeutilistel eesmärkidel.

Peptiidi voltimiseks selektiivselt kasutati kaheastmelist oksüdatsiooniprotokolli, nagu eelnevalt kirjeldatud. Lühidalt, et moodustada esimene disulfiidsild Cys2 ja Cys8 vahel, lisati peptiidid aeglaselt võrdsele mahule 20 mM kaaliumferritsüaniidi K3 [Fe CN 6 ] ja 0, 1 M Tris alust, pH viidi äädikhappega väärtusele 7, 5.

Lahust segati, et reageerida 45 minutit, ja monotsükliline peptiid puhastati pöördfaasi HPLC abil. Spodoptera frugiperda Sf9 putukarakke hoiti Insect-Xpress valguvabas söötmes Lonza ilma seerumita.

Konstruktsioon transformeeriti bakteriaalseteks DH10Bac-kompetentseteks rakkudeks ja ekstraheeritud bakmiid transfekteeriti Sf9 rakkudesse, kasutades Cellfectin II reagenti Invitrogen. Madala tiitriga viirused P0 koguti pärast transfekteeritud rakkude inkubeerimist temperatuuril 26 ° C 7 kuni 9 päeva ja seejärel amplifitseeriti, et saada kõrge tiitriga viiruse varu.

Edasine puhastamine viidi läbi geelfiltratsiooni kromatograafia abil, kasutades Superdex kolonni GE Healthcare. Kristalle kasvatati edukalt 18 ° Kiire roobastee rasva kadu pdf juures, kasutades istuva tilga auru difusiooni meetodit, segades 1, 5 M liitiumsulfaadi monohüdraati, 0, 1 M Tris, PH 8. Difraktsiooniandmed olid indekseeritud, integreeritud ja skaleeritud programmiga HKL Kõik konstruktsioonilised arvud tehti PyMol 26 abil. Molekulaarne modelleerimine, dokkimine ja simulatsioonid Kõik modelleerimine, dokkimine ja simulatsioonid viidi läbi Discovery Studio Client 4.

Inimese nAChR-de ekstratsellulaarsete ligandiga seonduvate domeenide nagu α3 2 β4 3, α3 2 β2 3 molekulaarmudelid genereeriti Ac- AChBP struktuuri malli põhjal, kasutades homoloogia modelleerimise programmi Modeler version 9. Mudelid on täiustatud külgahela täiustamise ja energia minimeerimise protsessiga.

Lemmik Postitused

CHARMmi jõuvälja kasutati kõigi simulatsioonide jaoks. Kõiki modelleerimis- ja dokkimisstruktuure kontrolliti programmiga Profiles-3D Discovery Studio platvormil 27, samuti MolProbity server 28, Seejärel lisati lõppkontsentratsioonile 0, 2 nM [ I ] märgistatud a-bungarotoksiin ja segusid inkubeeriti veel 5 minutit.

Sidumine peatati kiire filtrimisega topelt DE filtritel Whatmanmis oli eelnevalt ligunenud sidumispuhvrisse, sidumata radioaktiivsus eemaldati filtritest väljapesemisega 3 x 3 ml sidumispuhvriga.

Mittespetsiifiline seondumine määrati kõigil juhtudel, kasutades 3-tunnilist eelinkubeerimist 10 µM a-kobratoksiini Naja kaouthia mürgiga. Ootsüüdid süstiti ühe päeva jooksul pärast koristamist ja salvestused tehti 1—4 päeva pärast süstimist, nagu eelnevalt kirjeldatud Ootsüüdid olid pinge pingutamisel mV juures toatemperatuuril.

Pidev gravitatsioon perfuseeriti standardse ND lahusega ja stimuleeriti 2-sekundiliste ACh-impulssidega üks kord minutis.

• Kaalulangus oo higistamine palavik
• Подлетел Тимми - на короткое бормотанье отвечали цветовые фразы Арчи, - заверил, что свою миссию выполнил, и попрощался с Ричардом.
• Poletada rasva hoides lihaseid
• Она потянулась и взяла Ричарда за руку.
• Хочется вкратце упомянуть еще об одном.

Kokku paigutati 5 minutiks kambrisse 5 μl erinevat kontsentratsiooni toksiini ja seejärel rakendati perfusioonisüsteemi, mille käigus rakendati iga minuti jooksul µM ACh 2-s impulsse, kuni saavutati konstantne ummistuse tase. Lõpptulemused saadi vähemalt 4 ootsüüdi kohta. Esialgse eelarveprojekti deponeerimine Koordinaadid ja difraktsiooniandmed on deponeeritud Protein Data Bankisse liitumiskoodiga 5CO5.

Lisainformatsioon Kuidas tsiteerida seda artiklit : Lin, B. Täiendav teave.