Proteasoomi subühik beeta2 pl β 2 subühik annab nii struktuurse terviklikkuse proteasoomi kui ka proteolüütilise aktiivsuse suhtes. On teatatud, et AGE-d võivad põhjustada kondrotsüütide apoptoosi ja suurendada MMP ekspressiooni, mis häirib kõhre homöostaasi [6, 8]. Nälg indutseerib dAtg8 konversiooni ja Atg geeni ekspressiooni Drosophila munasarjades. Mutantkloonide positiivseks identifitseerimiseks kasutasime ubikvitiiniga konjugeeritud valke tuvastavaid markereid. Kimäärsete emasloomade analüüs näitab, et munarakkude arenguks on vajalik FC-de autofagia, kuid mitte GC-de puhul. Kuid LTR-i värvimine germariumis oli nähtav ka toidetingimustes joonis 1a, täiendav joonis 1B , kuid suurenes näljahäda ajal.

Areng Abstraktne Ubikvivalatsiooni peamine funktsioon on sihtmärkvalkude viimine proteasoomi lagundamiseks. Apoptootilises tees Drosophilas reguleerib apoptoosi valgu 1 Diap1 inhibiitor inaktivaatori kaspaas Dronc surmade regulaator Nedd2-sarnane kaspaas; kaspaas-9 ortoloog aktiivsust ubikvikalatsiooni abil, mis väidetavalt on suunatud Dronc'ile proteasoomi lagundamiseks. Kasutades geneetilist lähenemist, näitame, et Dronc valk ei kuhjunud epiteelirakkudes, millel on halvenenud proteasoomi funktsioon, mis viitab sellele, et proteasoomi ei ole see vastuolus ootusega.

Samamoodi ei too autofagia vähenemine, alternatiivne kataboolne rada, kaasa Dronc valgu suurenenud tasemele.

Raku puhastada

Kuid proteasoomi ja autofagia kombineeritud kahjustus põhjustab Dronc valgu tasemete akumulatsiooni, mis viitab sellele, et autofagia kompenseerib proteasoomi kadu Dronc'i käibe suhtes. Järjekindlalt näitame, et proteasoomi kadu suurendab endogeenset autofagiat epiteelirakkudes.

Soovitame, et parendatud autofagia laguneks Dronc, kui proteasoomi funktsioon on kahjustatud. Main Eukarüootsetes rakkudes on kaks peamist kataboolset rada, mis lagundavad suurema osa rakulistest valkudest, ubikvitiini-proteasoomi süsteemist UPS ja makroautofagiast edaspidi rasva kadu autophagy.

Kaks välimist rõngast moodustavad seitse a- tüüpi subühikut, millest kaks sisemist rõngast on seitse β- tüüpi subühikut. See on peamiselt tingitud tähelepanekust, et autofagia võib ka lagundada ubikvitaalseid valke. Need valguaggregaadid on sageli seotud neurodegeneratiivsete haigustega inimestel.

Neid toodetakse inaktiivsete zümogeenidena, mis aktiveeritakse kas suurte valgu komplekside, näiteks apoptooside initsiaator-kaspaasid või proteolüütilise töötlemise efektor-kaspaasid kaudu.

Vastupidi, oleme näidanud, et Diap1 aktiivsuse kadumine või suurenemine ei mõjuta Dronc valgu tasemeid ellujäänud rakkudes. Seetõttu on praegu ebaselge, kuidas Dronc valgu tasemeid elusrakkudes kontrollitakse, et vältida nende potentsiaalselt ohtlike valkude kahjulikku kogunemist ja automaatset töötlemist.

Siin me teatame, et Drosophila silma kujutavate ketaste epiteelirakkudes ei mõjuta proteasoomi kahjustus Dronc valgu taset. Samamoodi ei mõjuta autofagia kaotus iseenesest Dronc'i valgu taset. Ent proteasoomi ja autofagia samaaegne kahjustamine põhjustab Dronc'i akumulatsiooni, mis viitab sellele, et autofagia võib kompenseerida proteasoomi kadu Dronc'i käibe suhtes. Järjekindlalt on autofagia suurenenud proteasoomi mutantides epiteelirakkudes.

Kokkuvõtteks võib öelda, et need andmed identifitseerivad Dronci kui proteasoomi ja autofagia ühist substraati. Tulemused Polüububiküülitud valkude kaalulangus 48 tundi on proteasoomi düsfunktsiooni jaoks sobiv marker Droni poolt Diap1 poolt esilekutsutud in vitro on eelnevalt täheldatud.

Esimene mutant mõjutab prosp2 geeni, tuntud ka kui DTS7 Drosophilas 51, mis kodeerib proteasoomi 20S katalüütilise südamiku β2 subühikut.

1. Sissejuhatus

Proteasoomi subühik beeta2 pl β 2 subühik annab nii struktuurse terviklikkuse proteasoomi kui ka proteolüütilise aktiivsuse suhtes. Teine mutant mõjutab Mov34 geeni tuntud ka kui p39Bmis kodeerib 19S regulatiivse kompleksi subühikut, mis vastab pärmi ja inimese regulatiivse kompleksi S12 regulatiivosale mitte-ATPaas-8 Rpn8. Mõlemad proteasoomi mutandid käituvad meie testides identselt vt allpool. Siiski võime me mutantsed kloonid positiivselt märgistada ja identifitseerida, kasutades antikehi, mis tunnevad ära ubikvitiini või ubikvitiini konjugeeritud valke.

Ubikvitiini vastased antikehad näitavad suurenenud immunoreaktiivsust prosp2 mutantkloonides joonis la '. GFP-st rasva kadu autophagy alad, mis tähistavad prosβ2- mutantrakke, on täiuslik ja ubikvitiini märgistuse suurenemine joonis 1a slimming numbrid. Näidatud on ubiquitiini aFK2 b ja FK1 c märgistatud prosp2- mosaiik-silma kujutlusplaatide tagumise osa suure suurendusega pildid x Selles ja kõikides teistes on tagumine osa paremal.

FK2 ja FK1 antikehad tuvastavad ubikvitiiniga konjugeeritud valke, kuid ei vabasta konjugeerimata ubikvitiini. Vasakpoolsed paneelid näitavad proteasoomi mutantsete rakukloonide positsioone GFP puudumise tõttu, keskel olevad paneelid näitavad eksperimenti magenta ja paremad paneelid on vasakpoolsete ja keskpaneelide ühendatud pildid.

Valged nooled näitavad mõned rakukloonid näidetena. Sarnased andmed saadi Mov34 mosaiikplaatide kohta täiendav joonis S1. Metsik-tüüpi mosaiigikontrollkettad ei näita ubikvitiini kuhjumist täiendav joonis S2.

FK1 ja FK2 antikehad tunnevad spetsiifiliselt ubikvitiiniga konjugeeritud valke, kuid mitte konjugeerimata ubikvitiini FK1 märgistab polü-ubikvileeritud konjugaate, FK2 märgistab mono- ja polüububikvileeritud valke.

rasva kadu autophagy kuidas poletada rasva maha reide

Metsik-tüüpi wt kontroll-mosaiikides wt-kloonides wt taustal ei täheldata ubikvitiini ja konjugeeritud ubikvitiini FK1 ja FK2 akumulatsiooni täiendav joonis S2mis viitab sellele, et ubikvitiiniga konjugeeritud valgud kogunevad spetsiifiliselt proteasoomi puudulikkusega rakkudesse in vivo, kooskõlas ootustega. Mutatsioonid proteasoomi allüksustes annavad tulemuseks kõrgendatud lõhustatud kaspaas-3 Proteasoomi inhibiitoreid kasutatakse rakusurma indutseerimiseks vähihaigetel, sealhulgas hulgimüeloomiga patsientidel.

Vahelduv paast - Intermittent Fasting

Järjekindlalt rasva kadu autophagy Bortezomibi proteasoomi farmakoloogiline inhibeerimine tervetel kärbsetel Drice'i lõhustumise pärast 4-päevast ravi.

Me kasutasime FK2 märgistust proteasoomi mutantsete rakkude positiivseks parim rasvapoletaja lahja valja ja identifitseerimiseks ning uuriti proteasoomi düsfunktsiooni tagajärgi kahjustatud rakkude ellujäämiseks. Tõepoolest, täheldasime proteasoomi puudulikkusega rakkudes suurenenud lõhustatud Caspase-3 cCsp-3 antikehade märgistamist joonis 2.

rasva kadu autophagy nv kaalulangus valjakutse

Kuid kõik mutantsed rakud ei sisalda cCsp-3 värvimist, mis viitab sellele, et mitte kõik neist ei ole apoptootilised. Siiski, kas apoptootilised või mitte, rasva kadu autophagy kõik proteasoomi puudulikud rakukloonid väga väikesed, mis näitab, et mutantsed rakud ei kasva väga hästi. Proteasoomi subühikute mutatsioonid põhjustavad rakusurma. Näidatud on suurte suurenduskujutiste kujutised x prosp2- mosaiik-silma kujutiste plaatide tagakambrist, millele on märgitud cCsp-3 a ', a' ' ja FK2 a' ', a' ''et tuvastada prosβ2 mutantset rakku kloonid.

Testisime seda rasva kadu autophagy, analüüsides Dronc'i valgu tasemeid prosβ2 ja Mov34 mutantsetes rakkudes, mis asuvad kolmanda instituudi vastsete silma arenevas tagaküljel. Valisime nendes analüüsides vastsete silma kujuteldava plaadi, sest normaalsetes tingimustes ei esine selles koes arengulist apoptoosi, vältides seeläbi füsioloogilise apoptoosiga komplikatsioone.

Üllatuslikult ei muudeta Dronc'i valgu tasemeid prosβ2 ja Mov34 mutantrakkudes joonised 3a — b ''. Samasuguseid tulemusi saadi ka teistsuguste prospte2 mutantide alleelide, tavaliselt kasutatavate DTS7 alleelide abil, mida kasutasime geneetilistes mosaiikides täiendav joonis S3. Kuid nendel tingimustel näib DTS7 alleel olevat nõrgem kui joonisel 3a kasutatud alleel, sest see ei põhjustanud polü-ubikvileeritud valkude akumulatsiooni FK1 antikeha rasva kadu autophagy ja mutantkloonid kasvasid palju suuremaks täiendav joonis S3.

Selle Dronc antikeha spetsiifilisus määrati eelnevalt dronc- mosaiik-silmade ja tiibade kujutiste plaatidel ning see antikeha võib samuti tuvastada Dronc-valgu akumulatsiooni. Näidatud on suured suurenduslikud pildid x prosp2 a ja c ja Mov34 b ja d mosaiik-silma kujutiste plaatide Dronc a ja b ja Kaalulanguse mullid c ja d jaoks. Mutantkloonide identifitseerimiseks kasutati FK2 märgistust.

rasva kadu autophagy number 1 viis rasva poletamiseks

Vasakpoolsed paneelid näitavad proteasoomi mutantsete rakukloonide positsioone GFP puudumisel. Keskpaneelides on proteasoomi mutantsete rakukloonide positiivne märgistus FK2 märgistusega magenta. Parempoolsed paneelid näitavad Dronc a ' ja b' ja Diap1 märgiseid c '' ja d '' punaselt.

Vt ka seotud jooniseid S3 ja S4. Kasutades Flag antikeha Dronc'i taseme jälgimise vahendina, ei tuvastanud me ka Flag-Dronc akumulatsiooni Mov34 mutantrakkudes täiendav joonis Rasva kadu autophagy.

Positiivse kontrollina analüüsiti Diap1 valgu tasemeid proteasoomi mutantsetes rakkudes, kuna Diap1 lagunemine on in vivo näidatud.

Kirjuta esimene kommentaar

Seega võib see test tuvastada akumuleeruvaid valke in vivo. Need andmed näitavad, et Dronci valgusisaldus elusrakkudes ei ole UPSi poolt reguleeritud või on olemas kompensatsioonimehhanismid, mis lülitavad Dronc'i proteasoomi kahjustusele.

Autofageeni geeni kadumine Atg7 ei mõjuta Dronc'i valgu taset Lisaks UPS-ile on autofagia tsellulaarne protsess, mis teadaolevalt lagundab valke. Autofageeni geen Atg7 kodeerib E1-aktiveerivat ensüümi kahe ubikvitiinisarnase konjugatsioonisüsteemi jaoks ja on oluline autofagia regulaator.

Me vähendasime RNAi poolt Atg7 funktsiooni või inaktiveeriti Atg7 mutantsetes rakukloonides silma kujutavatel ketastel. Sarnaselt proteasomaalsele düsfunktsioonile ei mõjuta kahjustatud Atg7 funktsioon Dronc'i valgu taset mosaiik-silma kujuteldavates ketastes joonised 4a — b ''.

Ainult Atg7 kadu ei mõjuta Dronc'i valgu taset. Dronc'i märgistamine Atg7 mosaiik-silmapilti.

Drosophilas põhjustab toitainete kadu rasvkoes autofagiat. Siin näitame, et nälg indutseerib autofagia idurakkude rakkudes ja folliikuli rakkudes FCs Drosophila munasarjades. Seda protsessi vahendab ATG-masinad ja see hõlmab Atg- geenide ülesreguleerimist. Kimäärsete emasloomade analüüs näitab, et munarakkude arenguks on vajalik FC-de autofagia, kuid mitte GC-de puhul. Kui loomadel puudub mõlemas rakutüübis Atg geeni funktsioon, tekivad munasarjad normaalselt, mis viitab sellele, et autofagia-kompetentsete GC-de ja autofagia puudulike FC-de kokkusobimatus põhjustab munade defektset arengut.

Atg7 oli RNAi a poolt reguleeritud või geneetiliselt inaktiveeritud mutantsetes rakukloonides b. Atg7- puudulikud kloonid on tähistatud GFP a ', b' puudumisega. Valged nooled tõstavad esile ühe klooni igas paneelis. Dronc valgu tasemed on muutmata Atg7- puudulike kloonide korral a ', b' '.

Selle küsimuse lahendamiseks inaktiveerisime Atg7 RNAi poolt autofagia prosp2 mutantsetes rakukloonides, kasutades mosaiikanalüüsi replikeeritava rakumarkeri MARCM meetodiga.

Tõepoolest, nii proteasoomi kui ka autofagia samaaegne kahjustus põhjustab Dronc valgu tugevat akumuleeruvate ketaste epiteelrakkudes joonised 5a — a '. Sarnased tähelepanekud tehti ka tiibade kujutiste ketastes, teises epiteelkoes joonised 5b — b ''. Need andmed näitavad koos, et Dronc'i valgu taset reguleerivad koordineeritult nii UPS kui rasva kadu autophagy autofagia.

Dronc rasva kadu autophagy kloonidesse, mis samaaegselt mutantsed proteasoomi ja autofagia suhtes. Mosaiik silm a ja tiib b kujutavad plaate, mis on kahekordselt puudulikud proteasoomi ja autofagia puhul, mis on tähistatud Dronciga punane. Mutant-rakukloonid on GFP-ga positiivselt märgistatud. Dronc akumuleerub kahekordse puudulikkusega rakukloonides.

Abstraktne

Rist viidi läbi temperatuuril 25 ° C. Näiteks Drosophilas on neuronites, rasvkoe rakkudes ja täiskasvanud kärbestes teatatud kompenseerivast autofagiast pärast proteasoomi kahjustust. See reporter on integreeritud autofagosoomidesse, mis küpsevad autolüsosoomideks. Autolüsosoomides kustutatakse reporteri GFP-osa fluorestsents, samas kui mCherry signaalid püsivad. Seetõttu sobib see reporter autofagoomidest autofagoomidest autolüsosoomideks jälgimiseks.

rasva kadu autophagy kaalulangus parast emaka fibroid emboliseerimist

Tõepoolest, kuigi nõrgad GFP signaalid esinevad Mov34 mutantsete rakukloonide alamhulgal, on olemas ka palju kloneid, rasva poletamine sudame loogisageduse skeem mCherry signaalid eksisteerivad üksi joonised 6a '' ja a ''mis viitavad sellele, et vähemalt nendes kloonides autofagoomidest autofagoomidest autolüsosoomid indutseeritakse vastuseks proteasoomi kahjustusele.

Proteasoomi kahjustatud funktsioon indutseerib autofagilise voolu. Mov mosaiik-silma kujutavad kettad, mis avaldavad GFP-mCherry-Atg8a-d autofagilise voolu markerina.